利用这些miRNA表达克隆研究相应基因或者蛋白的表达调节情况。配合采用荧光素酶报告基因的靶标克隆,可以和miRNA表达克隆一起进行miRNA功能筛选合确证,以及miRNA靶标基因的筛选和确证的交互实验。
复能基因同时也提供多套的人类基因组和小鼠基因组的全长基因ORF表达克隆。用于miRNA靶标的对应蛋白的功能互补实验。由于这些ORF克隆不含3’-UTR,可以用于特种miRNA对内源靶基因抑制后的拯救实验,进一步确证miRNA功能及靶标基因。
复能基因采用基于猫免疫缺陷病的慢病毒系统,构建了miRNA前体表达克隆的载体骨架。RNA聚合酶III型的H1启动子驱动转录前体miRNA的茎环前体(大约有150核苷酸长度)。 随后通过RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一载体的CMV启动子的驱动下共表达报告基因eGFP,双顺反子下游的新霉素筛选基因也同时表达。可作为监测miRNA表达,转染和转化的效率的参考标准。
RISC-miRNA复合体通过结合靶基因的mRNA的3’非编码区(3’-UTR)成功地调节靶基因。1)表达水平和翻译水平的抑制;2)mRNA的被切割,被降解和丰度的下降。