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免疫組化服務(wù)的相關(guān)問題解析

發(fā)布日期: 2022-10-23
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 免疫組化服務(wù)是通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。
1、出現(xiàn)非特異性背景染色怎么辦?  
(1)沖洗不充分解決:每步?jīng)_洗3×5  
(2)組織中含過氧化物酶未阻斷解決:可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長  
(3)組織中含內(nèi)源性生物素解決:正常非免疫動物血清再封閉  
(4)血清蛋白封閉不充分解決:延長血清蛋白封閉時間  
2、脫片產(chǎn)生的原因有哪些?  
(1)組織切的不好,切的不均勻。  
(2)時間短,溫度不夠。  
(3)操作不規(guī)范,有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩,用衛(wèi)生紙從邊緣上慢慢吸水。  
(4)抗原修復(fù)的時候高壓時間過長了。此外,用EDTA修復(fù)比檸檬酸容易脫片。  
(5)使用PBS的時候盡量用泡的,不要沖。  
3、染色陰性怎么辦?  
(1)操作步驟錯誤,重新試驗,設(shè)立陽性對照  
(2)組織中無抗原,設(shè)立陽性對照片,以驗證實驗結(jié)果  
(3)一抗與二抗種屬連接錯誤,仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤  
4、蘇木素復(fù)染后氨水返藍(lán)怎么做?  
返藍(lán)可以用堿性溶液(PBS/Na2HPO4/淡氨水)或45度溫水.冷水藍(lán)化均可。一般藍(lán)化5~10min。